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次氯酸钠杀灭灭微生物效果、腐蚀性与毒性的实验观察

发布日期:2016年11月13日 点击:817

对适用于家庭及小型服务行业的小型消毒水发生器电解食盐水15min产生的次氯酸钠溶液,以碘量法检测,有效氯含量平均为1485mg/L;用pH计测得平均pH值为8.88。对其杀灭微生物效果、腐蚀性与毒性进行了试验观察。现将结果报道如下:

1方法

1.1中和剂选择试验

试验菌为金黄色碗萄球菌(ATCC6538)、白色念珠菌(ATCC10231)、枯草杆菌黑色变种(ATCC9372)芽胞,将其悬液分别滴染于脱脂白平纹布片(1.0cmx1.0cm)上,制成茵片。试验设平行8组:(1)消毒剂+菌片;(2)(消毒剂+菌片)+中和剂;(3)中和剂+菌片;(4)(消毒剂+中和剂)+菌片;(5)磷酸盐缓冲液(PBS)+菌片(正常菌对照);(6)未加茵PBS对照;(7)未加菌中和剂对照;(8)未接种菌的培养基对照。试验结果,以第1组无菌生长或菌数远少于第2cfu/片,第3、4,5组组间菌数相差<10%,第6、7、8组无菌生长,表明所选中和剂及其浓度适宜。

1.2栽体定量杀菌试验

试验用大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草杆菌黑色变种芽胞菌片进行。试验时,将菌片放人5.0ml消毒液(阳性对照为PBS)中。作用至预定时间,取出菌片,放入5.0ml中和剂溶液中。中和作用10min,敲打试管,以洗下菌片上菌并混匀。取该液或其稀释液0.5ml作活菌计数,计算杀灭率。

观察有机物影响时,以加有小牛血清的菌悬液滴染布片,制成菌片。

1、3破坏乙型肝炎表面抗原试验

用含5%小牛血清的0.02mol/LPBS,将纯化乙型肝炎表面抗原(HBsAg)稀释成含量为100μg/ml的悬液,取0.02ml涂染于不锈钢圆片(直径15mm)上,置37℃干燥30min。试验时,用50μl消毒液(阳性对照为PBS)覆盖HBsAg片表面。作用至规定时间,将HBsAg片移人1.0ml中和荆溶液(阳性对照为消毒液与中和剂作用后的中和产物溶液)中。中和作用10min,振荡试管30S,以洗下片上HBsAg并混匀。取0.1ml该液,用ELISA法检测HBsAg抗原性。检测结果,以试验组OD值(S)与阴性对照(中和产物溶液)OD值(N)的比值(S/N)<2.1为HBsAg阴性。

1.4餐具消毒试验

试验时,将0.2ml大肠杆菌悬液染于瓷碗内侧上部(50mm×50mm),竹筷取食端12.5cm,用无菌L棒涂匀,置37℃烤干。将15只碗、15双筷浸泡于4000ml消毒液(阳性对照为PBS)中。作用至规定时间.取出碗、筷,在染菌部位用无菌棉拭涂抹采样,将棉拭头剪人盛有中和剂溶液的试管中。敲打试管.以洗下棉拭上菌并混匀。取洗脱液作活菌计数,计算杀灭率。

1.5腐蚀金属试验

将铝、铜、碳钢、不锈钢分别制成直径240.0mm±0.1mm、厚度1.0mm±0.1mm的圆片,并打一直径20.0mm±0.1mm小孔。试验时,除去金属片表面油污并洗干净,用120号粒度水砂纸磨去表面氧化层,再用洗涤剂浸泡后冲洗干净,用滤纸吸干水份,置50烘干lk测量片的实际直径、厚度与孔径(精确至0.1量(精确至0.1mg)。将用蒸馏水稀释的次氯酸钠溶液(有效氯1000mg/L)装于4只广口瓶内(600ml/瓶).同种金属片悬挂浸于l瓶消毒液中,片间相隔10mm以上。24h更换一次消毒液,连续浸泡至72h。取出金属片,清除腐蚀部份并刷洗干净,吸干永份,置50烘干lh。称取浸泡后片的质量,计算腐蚀速率(R)。

1.6毒性试验

1.6.1急性经口毒性试验

取体重18~28g小白鼠,随机分成4组,每组20只,雌,雄各半。于试验前16h禁食,正常供饮水。按不同量对各组空腹小鼠经口灌胃后,正常供食、供水,观察死亡情况,计算LD。

1.6.2皮肤一次性刺激试验

取健康成年哈白兔4只,饲养一周后,将背部脊柱两侧毛分别去掉3cm×3cm,不损伤表皮。将0.2mI消毒液均匀涂抹在两层2.5cm×2.5cm纱布上,贴于左侧皮肤上.再覆盖硫酸纸与两层纱布后.用胶布固定。作用4h揭去。另一侧皮肤作对照。

1.6.3微核试验

将50只小白鼠分为5组,每组10只,雌,雄各半。3个试验组分别按体重用5000mg/kg、2000mg/kg,500mg/kg剂量消毒液灌胃,阴性对照组用蒸馏水灌胃。阳性对照组腹腔注射环磷酰胺(40mg/kg).每日一次,连续二次。常规制片镜检,计算细胞微核率。

1.6.4蓄积毒性试验

取雌、雄小白鼠各10只,按体重计算染毒剂量,第1~4天用0.1LD50剂量,以后每4天递增1.5倍剂量,井称重一次,直至20d

结果

2.1中和剂试验结果

在金黄色葡萄球菌和白色念珠菌试验中,用含0.5%硫代硫酸钠、0.05%吐温80和0.05%卵磷脂PBS作中和剂,枯草杆菌黑色变种芽胞试验中用含0.5%硫代硫酸钠、0.5%吐温80和0.1%卵磷脂PBS作中和剂,中和试验浓度的次氯酸钠,均符合所定要求(表1)。此外,经试验选择,对HBsAg试验需用含0.2%硫代硫酸钠的溶液。

表1 次氯酸钠中和剂试验结果

2.2杀茵效果

试验表明,对大肠杆菌用次氯酸钠含有效氯250mg/L溶液,对金黄色葡萄球菌用其有效氯300mg/L溶液,作用7min,杀灭率均达100%(表2):对白色念珠菌用其有效氯500mg/L溶液,对枯草杆菌黑色变种芽胞用其有效氯800mg/L溶液,作用12min,杀灭率亦均为100%(表3)。当滴染布片的金黄色葡萄球菌悬液中含25%或50%小牛血清时,杀灭率明显降低(表4)

表2 次氯酸钠对细菌繁殖体的杀灭效果

表3 次氯酸钠杀灭白色念珠菌与细菌芽孢的效果
表4 有机物对次氯酸钠杀灭金黄色葡萄球菌效果的影响

2.3对HBsAg抗原性破坏作用

试验表明,以次氯酸钠含有效氯750mg/L溶液作用20min,可破坏HBsAg抗原性(表5).

表5 次氯酸钠对HBsAg的破坏作用

2.4对餐具消毒效果

经检测,在19~21℃条件下,对染大肠杆菌量为1068000~2317000cfu/cm2的瓷碗与竹筷,用含有效氯250mg/L的次氯酸钠溶液浸泡5min,杀灭率>99.96%;浸泡20min,杀灭率均达99.99%;浸泡40min,杀灭率均达100%。

2.5腐蚀性

检测表明,含有效氯1000mg/L的次氯酸钠溶液,对不锈钢有轻度腐蚀(0.0100<R<0.1000)作用,对铝有中度腐蚀(0.1000<R<1.0000)作用,对碳钢与铜均有重度腐蚀(R>1.0000)作用(表6)

表6 次氯酸钠消毒液对金属的腐蚀作用

2.6毒性

经测定,次氯酸钠对雌、雄小白鼠经口灌胃LD50>10000mg/kg(体重),属实际无毒类,对兔皮肤一次性刺激积分为0,属无刺激作用,在蓄积毒性试验中,给药20d后,雌、雄小鼠均无死亡,为弱蓄积性。

3结语

结果表明,对布片上金黄色葡萄球菌、大肠杆菌,需分别用含有效氯300mg/L与250mg/L的次氯酸钠溶液作用7min,杀灭率达100%;对布片上白色念珠菌,枯草杆菌黑色变种芽胞,则需分别用含有效氯500mg/L与800mg/L的该液作用12min,杀灭率达100%:对不锈钢片上HBsAg,用其含有效氯750mg/L溶液作用20min.可破坏HBsAg抗原性。所需剂量均比对悬液中细菌繁殖体与芽胞、HBsAg为大‘”。其杀菌作用因有机物存在而减弱。其1000mg/L有效氯溶液对所试金属有轻度至薏度腐蚀作用。该消毒剂属实际无毒、对皮肤无刺激类化合物。

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